光學顯微鏡光線在均勻的各向同性介質中，兩點之間以直線傳播，當通過不同密度介質的透明物體時，則發生折射現象，這是由于光在不同介質的傳播速度不同造成的。當與透明物面不垂直的光線由空氣射入透明物體(如玻璃)時，光線在其介面改變了方向，并和法線構成折射角。

　　透鏡是組成顯微鏡光學系統的最基本的光學元件，物鏡目鏡及聚光鏡等部件均由單個和多個透鏡組成。依其外形的不同，可分為凸透鏡(正透鏡)和凹透鏡(負透鏡)兩大類。

　　當一束平行于光軸的光線通過凸透鏡后相交于一點，這個點稱"焦點"，通過交點并垂直光軸的平面，稱"焦平面"。焦點有兩個，在物方空間的焦點，稱"物方焦點"，該處的焦平面，稱"物方焦平面";反之，在象方空間的焦點，稱"象方焦點"，該處的焦平面，稱"象方焦平面"。

　　光線通過凹透鏡后，成正立虛像，而凸透鏡則成正立實像。實像可在屏幕上顯現出來，而虛像不能。

　　1. 當物**于透鏡物方二倍焦距以外時，則在象方二倍焦距以內、焦點以外形成縮小的倒立實象;

　　2. 當物**于透鏡物方二倍焦距上時，則在象方二倍焦距上形成同樣大小的倒立實象;

　　3. 當物**于透鏡物方二倍焦距以內，焦點以外時，則在象方二倍焦距以外形成放大的倒立實象;

　　4. 當物**于透鏡物方焦點上時，則象方不能成象;

　　5. 當物**于透鏡物方焦點以內時，則象方也無象的形成，而在透鏡物方的同側比物體遠的位置形成放大的直立虛象。

　　光學顯微鏡的成象(幾何成象)原理

　　只有當物體對人眼的張角不小于某一值時，肉眼才能區別其各個細部，該量稱為目視分辨率ε。在最佳條件下，即物體的照度為50~70lx及其對比度較大時，可達到1'。為易于觀測，一般將該量加大到2'，并取此為平均目鏡分辨率。

　　物體視角的大小與該物體的長度尺寸和物體至眼睛的距離有關。有公式y=Lε

　　距離L不能取得很小，因為眼睛的調節能力有一定限度，尤其是眼睛在接近調節能力的極限范圍工作時，會使視力極度疲勞。對于標準(正視)而言，最佳的視距規定為250mm(明視距離)。這意味著，在沒有儀器的條件下，目視分辨率ε=2'的眼睛，能清楚地區分大小為0.15mm的物體細節。

　　光學顯微鏡在觀測視角小于1'的物體時，必須使用放大儀器。放大鏡和顯微鏡是用于觀測放置在觀測人員近處應予放大的物體的。